大肠杆菌都有质粒吗 (大肠杆菌质粒)
大肠杆菌都有质粒吗 (大肠杆菌质粒)
1、大肠杆菌中存在质粒不一定都具有抗性基因，但有抗性的大肠杆菌一般都与其具有质粒有关。
1、利用噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。病毒载体 质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要。
2、质粒是基因工程中最常用的载体。质粒广泛存在于生物细胞中，是一种非必需的细胞器。从分子组成看，有DNA 质粒，也有RNA 质粒；从分子构型看，有线型质粒、也有环状质粒；其表型也多种多样。
3、因为大肠杆菌的遗传背景清楚、各项优势明显。 像最常用的大肠杆菌质粒是pBR322质粒，因为其复制是松弛型（质粒能大量的复制），具有四环素和氨青霉素抗性基因标记（便于筛选），并具有一些便于应用的限制性核酸内切酶位点。
4、现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)。
5、大肠杆菌里本来就有质粒，换句话说，质粒可以从大肠杆菌里提取出来；而用噬菌体的宿主细胞就是大肠杆菌。所以受体细胞是大肠杆菌时通常选用质粒和噬菌体作载体。
6、穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制。比如说通常能够在哺乳动物，酵母或者其他细菌复制表达的质粒，同时可以在大肠杆菌内复制。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。
1、质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。质粒的套数（copynumber）在细胞里从单一到数千都有可能。
2、大肠杆菌常温放置会导致质粒降解，但短时间比如1-3天问题不大，而且一天只会导致大肠杆菌因为缺乏营养而停止生长，可以用来抽提质粒。超过三天会开始降解，一周后明显降解。质粒在4度可放置数个月，-20保存数年。
3、这个由几个方面的因素决定：保存的酶切质粒是否经过纯化，如果经过纯化，比较容易保存 此酶切质粒是否经过反复冻融。
1、大肠杆菌是原核生物，目的蛋白质基因如果是原核生物的基因：经测序正确后，利用PCR扩增该基因，酶切连接到质粒，转化大肠杆菌筛选阳性克隆，鉴定正确后诱导表达。
2、大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
3、转化 目前实验室常用的主要有热激转化和电转化 热激转化主要运用氯化钙处理大肠杆菌细胞，使其细胞壁细胞膜出现“穿孔”，这样通过冰浴及热激作用将重组质粒转进细胞内。
4、也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制！通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，不断的复制，来得到目的产物。这就是转化的目的。
5、将目的基因导入大肠杆菌和酵母菌是为了让目的基因得以表达，我们知道，基因的作用是传递遗传信息，而遗传信息的表达就是通过转录等生成特定的蛋白质，而蛋白质就是生物表达其生物特性的基础。
6、农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。
实验室用公司试剂盒提取质粒，一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取，基本原理是先加入rna酶，把rna去掉，然后用碱裂解菌体，用酸平衡，并且sds和蛋白质结合形成沉淀，顺便把与蛋白结合的基因组dna沉淀下来。
RNA、蛋白质、细胞膜等细 胞器及其他大分子物质分离的过程，因此质粒的抽提大致可分为：细菌的培养、收集与裂解；质粒DNA 的分离与纯化；浓度、纯度的鉴定三个过程。
本实验旨在从大肠杆菌中提取质粒DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳检测提取出的质粒DNA的纯度和大小。
EP管是一种小型的离心管，又称为EP(eppendorf)管。可以与微型离心机配套使用，用于微量试剂的分离 微量离心管离心。
煮沸裂解法对于小于15kb的小质粒很有效，可用于提取少至lmL（小量制备），多至250mL（大量制备）菌液的质粒，并且对大多数的大肠杆菌菌株都适用。
操作步骤： 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质 粒。
1、lb平板培养后，挑单克隆摇菌，将菌液与80%的灭菌甘油1：1混合，-20保存，然后放-80°C保存。
2、保存两份好了，DNA和 大肠杆菌，都可以放在-80度冰箱。
3、一定要在平板上划线之后挑取单菌落进行扩大培养吗？是的，这样才能保证菌种的纯度，保证它们都是来自同一个克隆（挑取的单菌落），才可以保证提取的质粒的纯度。
